葉綠體萃取

此為高中實驗之一，雖然不是說很難，但一定要有離心機和離心管。

材料做法很簡單，如下(但是是粗萃取)：

1只要用任何一種植物葉片(建議是深綠色、葉片較軟的種類，我們以前是用菠菜)

2切碎，加一些20%的蔗糖水溶液(目的是使葉綠體融入，一般市面上的砂糖即可配置，不必再到化工材料行)

3然後用果汁機攪打至液態濃稠狀。

4過濾出綠色的蔗糖水溶液(渣滓就可以丟棄不用了)

5將溶液放入離心管(不超過八分滿)，放到離心機中(約10分鐘，轉速3000rpm)

6完成後，用滴管將上面澄清液吸出，下方綠色沉澱即葉綠素

以下再提供丙酮、酒精的萃取方法：

酒精萃取方法如下：
1、選取適當大小的健康完全展開之成熟葉片，測量葉面積並測量葉片鮮重，將葉片使用解剖刀略微切碎後置於5ml 100%酒精內，於室溫下放置黑暗處隔夜。

2、用離心機離心(3000rpm,10分鐘)後，吸取上清液1ml置於石英管中。

3、使用分光光度計於649、665nm下測量濾液之吸收率(A)，光度計需使用100%酒精當blank校正歸零，才可以開始量測，不同光度計使用方法都不相同，需學習光度計使用方法，因此無法在此詳細說明。

4、使用以下列公式計算葉綠素a、b以及葉綠素總量
(reference: Wintermans, J. F. G. M., and A. De Mots. 1965.
Spectrophotometric characteristics of chlorophylls a and b and their
pheophytins in ethanol. Biochimica et Biophysica Acta 109: 448-453.)。

葉綠素a含量= (13.7×A665-5.76×A649)*總萃取毫升數
葉綠素b含量=(25.8×A649-7.60×A665)*總萃取毫升數
葉綠素總量=(6.1×A665+20.04×A649)*總萃取毫升數

ps.A665的意思是在665nm下的吸收值。

丙酮萃取方法如下：
1、定量葉片鮮重公克數，置於研缽中並使用少量丙酮(80%)將葉片研磨成泥。

2、以濾紙過濾並收集濾液，將研缽上之殘渣以及率紙上殘渣再次使用丙酮萃取，紀錄所萃取之毫升數。

3、使用分光光度計於663nm、645nm測量吸收值，並使用80%丙酮當blank校正歸零，即可測量。

4、計算方法如上，但將665值換為663值，649值換為645值，公式即可使用。

ps.如果還不夠清楚，可以去全國碩博士論文網尋找葉綠素萃取相關論文，可以得到較詳細解答，或者去大學圖書館借普通植物學實驗或者植物生理學實驗類似相關書籍，可以知道更詳細。




2013-11-05 21:27:48 補充：
馬克大大很細心呢~
葉綠體只能使用粗萃取
要萃取出葉綠素才能用下面的方法~

2013-11-12 09:40:11 補充：
粗萃取第六項講錯了~葉綠素要改成葉綠體

參考下面的網址看看

http://phi008780520.pixnet.net/blog

這個高中課本就有了。

2013-11-05 12:16:00 補充：
葉綠素是葉綠體中的成份，葉綠體不能用溶劑萃取。