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蒙娜麗莎的畫中人是誰今天無法確切考證,藝術史學家曾討論過多種可能性。許多人相信畫中的女士是一位佛羅倫薩富有的絲綢商和政府要員的妻子。這個理論來自於達芬奇晚年的一句話,他提到過一幅「巨人朱利亞諾梅迪契委任的一位佛羅倫薩貴婦」的肖像。
達芬奇的第一位傳記作者說,蒙娜麗莎確有其人,她是一位弗朗西斯科戴爾吉奧亢多(Francesco del Giocondo)的夫人。吉奧亢多的確存在過,他是佛羅倫薩的一位富商,他在當地的政治界也是有權有勢的。關於他的夫人麗莎格拉迪尼(她1479年出生,1495年於吉奧亢多結婚)我們今天幾乎一無所知。事實上沒有任何歷史記錄說明她是梅迪契的情人或達芬奇的確是指她。
達芬奇後來還有一句話產生過一些混亂。在這句話中他提到蒙娜麗莎和一幅弗朗西斯科戴爾吉奧亢多的肖像。因此有人提出了一個有爭議的理論說蒙娜麗莎是一個男人。
這幅畫的意大利語標題La Gioconda來自達芬奇1625年的一封信。在這封信中他說這幅作品展示了一位Gioconda的半身像。但在這裡必須註明的是,在意大利語中Gioconda也是「一位寬心的婦人」的意思,並不一定是一個名字。
有人提出了一個建議說蒙娜麗莎其實是一幅自畫像。假如在電腦上把蒙娜麗莎的像與達芬奇的一幅自畫像重疊到一起的話,兩幅像的面部一模一樣。但批評者認為這個結果只不過是因為兩幅像是同一個畫家用同一種畫風畫而造成的。
還有人提出一個建議說蒙娜麗莎實際上是一位米蘭的大公夫人。達芬奇為這位夫人做了11年的宮廷畫家。畫中人的深綠色衣服說明她是這個大公家庭裡的一為貴婦人。而蒙娜麗莎與這位大公夫人的其他肖像的相似性是顯而易見的。
有加拿大科學家利用紅外線成像,發現這幅偏暗的畫像曾經經過修改,原本的畫像中蒙娜麗莎是盤髮而非散髮,並且披着孕婦穿的薄紗,可以肯定這幅畫是為了慶祝第二胎的出生。
德國海德堡大學專家證實,達芬奇(Leonardo da Vinci)畫作《蒙娜麗莎》那位微笑女子,的確是佛羅倫薩富商焦孔多的妻子蓋拉爾迪尼(Lisa Gherardini)。他們發現達芬奇朋友亞美利哥(Agostino Vespucci)1503年10月於一本書的書邊上寫明,達芬奇當時在畫3幅畫,其一是蓋拉爾迪尼畫的肖像。