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一、簡介：
維生素C早在1907年即被發現具有預防及治療壞血病(Scurvy)之功效，故在藥學上稱為抗壞血酸(Ascorbic acid) ，然其化學結構直到1932年才被鑑定出來。天然的維生素C 對平面偏極光成左旋性，而在藥學上可分為還原型的L-抗壞血酸(L-Dehydroascorbic acid)兩稱，但氧型化的維生素C極易被水解，破壞其環內酯(Lactone)結構而失去活性，所以，市售維生素C均為還原型的左旋維生素C。
二、原理：
還原型抗壞血酸能還原染料2.6-二氯酚靛酚，該染料在酸性中呈紅色，被還原後紅色消失。還原型抗壞血酸還原2.6-二氯酚靛酚後，本身被氧化成脫氫抗壞血酸。在沒有雜質干擾時，一定量的樣品提取液還原標準2.6-二氯酚靛酚的量與樣品中所含維生素C的量成正比。
三、試劑：
(1)2％草酸溶液：溶解20克草酸結晶於200毫升水中，然後稀釋至1000ml。
(2)1％草酸溶液：取上述2％草酸溶液500ml，用水稀釋至1000m1。
(3)抗壞血酸標準溶液：準確稱取20mg抗壞血酸，溶於1％草酸溶液中，移入10ml量瓶中，幷用1％草酸溶液稀釋至100毫升，混勻，置冰箱中保存。
使用時吸取上述抗壞血酸5ml，置於50毫升容量瓶中，用1％草酸溶液定容之。此標準使用液每毫升含0.02mg維生素C。
標定：吸取標準使用液5m1於三角燒瓶中，加入6％碘化鉀溶液0.5ml，1％澱粉溶液3滴，再以0.001N碘酸鉀標準溶液滴定，終點爲淡藍色。
計算如下：
抗壞血酸濃度（mg/ml）=( V1×0.088)/V2
V1：滴定時所耗0.001N碘酸鉀標準溶液的量(ml)
V2：所取抗壞血酸的量(ml)
0.088：1ml 0.0001N碘酸鉀標準溶液相當於抗壞血酸的量(mg／m1)
(4)2.6：二氯靛酚溶液：稱取碳酸氫鈉52mg，溶於200ml沸水中，然後稱取2.6-二氯靛酚50mg，溶解在上述碳酸氫鈉的溶液中，待冷，置於冰箱中過夜，次日過濾置於250ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。此液應貯於棕色瓶中幷冷藏，每星期至少標定1次。
標定方法：取5m1已知濃度的抗壞血酸標準溶液，加入1％草酸溶液5ml，搖勻，用上述配製的染料溶液滴定至溶液呈粉紅色於15秒不褪色爲止
每毫升染料溶液相當於Vc的毫克數=滴定度(T)=(C×V1)/V2
式中：
C；抗壞血酸(V)的濃度(mg／m1)
Vl：抗壞血酸的量(m1)
V2：消耗染料溶液量(m1)
(5)0.1N碘酸鉀溶液：精確取乾燥的碘酸鉀0.100ml。0.3567克用水稀釋至100ml.
(6)0.001N碘酸鉀溶液：吸取0.1N碘酸鉀溶液1ml，用水稀釋至100毫升。此溶液1ml相當於抗壞血酸0.088mg。
(7)1％澱粉溶液。
(8)6％碘化鉀溶液。
四、操作方法：
1、稱取適量(50.0-100.0克)樣品，加等量的2％草酸溶液，倒入組織搗碎機中搗成勻漿。稱取10.00-30.00克漿狀樣品(使其含有抗壞血酸1-5mg)，置於小燒杯中，用1％草酸溶液將樣品移入100毫升容量瓶中，幷稀釋至刻度，搖勻。
2、將樣液過濾，弃去最初毫升濾液。若樣液具有顔色，用白陶土(應選擇脫色力强但對抗壞血酸無損失的白陶土)去色，然後迅速吸取5-lOml濾液，置於50ml三角燒瓶中，用標定的2.6-二氯靛酚染料溶液滴定之,直至溶液呈粉紅色於15秒內不褪色爲止。
計算：
每百克樣品中抗壞血酸毫克數＝(V .T)/W×100
V：滴定時所耗去染料溶液的量(ml)；
T：1ml染料溶液相當於抗壞血酸標準溶液的量(mg)
W：滴定時所取的濾液中含樣品量(g)．
五、說明：
(1)所有試劑配製最好用重蒸餾水。
(2)樣品取樣後，應浸泡在已知量2％草酸溶液中使抗壞血酸受損失。以免發生氧化，使抗壞血酸受損失。
(3)對動性的樣品可用10％三氯醋酸代替2％草酸溶液提取；對含有大量Fe的樣品，如儲藏過久的罐頭食品可用8％醋酸溶液代替草酸溶液提取。
(4)整個操作過程要迅速，防止還原型抗壞血酸被氧化。
(5)若樣品濾液無色，可不加色陶土。須加白陶土的，要對每批新的白陶土測定回收率。加白陶土脫色過濾後，樣品要迅速滴定。
(6)滴定開始時，染料溶液要迅速加入，直至紅色不立即消失而後盡可能一滴一滴地加入，幷要不斷振動三角燒瓶，直至呈粉紅色於15秒內不消失爲止。樣品中可能有其他雜質也能還原2.6-二氯靛酚，但一般雜質還原該染料的速度均較抗壞血酸慢，所以滴定時以15秒鐘紅色不褪爲終點。
(7)測定樣品溶液時必須同時作一空白對照，樣品溶液滴定的毫升數須扣除空白液滴定的毫升數。
參考: GB 6195—86 水果、蔬菜維生素C含量測定法（2,6－二氯靛酚滴定法）
